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用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物

用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物

本文摘要:蛋白质糖基化是生命系统十分最重要的翻译成后标记之一,在免疫系统辨识,蛋白黏液,信号转导等生命过程中充分发挥了最重要起到。与蛋白连接的多聚糖是这些功能的最重要载体,尤其是对于单克隆抗体药物,多聚糖部分对药物的生物活性具有最重要的影响。因此,发展分离出来效率高,检测灵敏度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具备十分最重要的意义。 针对糖基化分析中的种种艰难,沃特世公司研发了亲水起到色谱法,以及荧光-质谱融合检测的分析方法。

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蛋白质糖基化是生命系统十分最重要的翻译成后标记之一,在免疫系统辨识,蛋白黏液,信号转导等生命过程中充分发挥了最重要起到。与蛋白连接的多聚糖是这些功能的最重要载体,尤其是对于单克隆抗体药物,多聚糖部分对药物的生物活性具有最重要的影响。因此,发展分离出来效率高,检测灵敏度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具备十分最重要的意义。

  针对糖基化分析中的种种艰难,沃特世公司研发了亲水起到色谱法,以及荧光-质谱融合检测的分析方法。ACQUITYUPLC系统因应荧光检测器(FLR)以及多聚糖分析专用(GST)色谱柱,比HPLC方法有更高的分离出来度。

多聚糖分析专用色谱柱装弹了1.7m的酰胺吸附剂,可在HILIC模式下有效地分离出来荧光标记的多聚糖。UPLC因应荧光检测器分析多聚糖可以取得很高的分离出来度和定量准确性,尤其是对于方位异构体以及有共流入的小峰分析;而质谱检测为糖链检验获取了更加多的结构信息。通过与标准糖链保有时间的较为,该流程能构建高通量的多聚糖定性定量,符合药物分析的多种市场需求。  一、色谱条件与标记后的多聚糖样品的分离出来  可通过HILIC方法,有效地分离出来2-AB标记的多聚糖混合物。

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对于方法优化,用于更缓的较宽梯度,可有效地提升保有时间上互为邻近的多聚糖峰之间的分离出来度;对于其它的参数,如流速、缓冲液浓度、流动互为pH及柱温等,一般也必须展开优化。图1示例用于优化后的HILIC色谱条件后,简单的2-AB标记的IgG多聚糖混合物获得了很好的分离出来,还包括E1/E2与F1/F2。实验所用梯度洗刷时间为45分钟,还包括色谱柱清除和再行均衡步骤。一般来说,一个样品的总分析时间在1小时内。

因此,与用于3.0-m填料的HPLC方法比起,用于1.7-m填料的UPLC色谱方法,不但分离出来效果更佳,而且运行时间更加较短。实验中用于2.1x150mm色谱柱。图1(B)中甘露糖5(峰C)与甘露糖6(峰H)可与附近多聚糖峰顺利分离出来,解决问题了共计流入的问题。


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